产品简介:
本产品是专用于探针法实时荧光定量PCR 的预混体系。2×浓度,操作简单方便;新一代的高效热启动酶,针对qPCR优化的PCR buffer与增强剂,使本产品特异性强,灵敏度高,在宽广的模板浓度范围可以得到良好的标准曲线,定量准确,重复性好,可信度高。
无需添加ROX Reference Dye:Roche LightCycler系列, MJ Research Chromo4, MJ Research Opticon 2, Takara TP-800, Bio-Rad系列, Thermo Scientific Pikoreal 96,Qiagen Corbett Rotor-Gene系列, Mastercycler ep realplex
添加Dye ROX A(50×):Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, QuantStudio 3, QuantStudio 5, QuantStudio 6, ViiA 7; Stratagene MX4000, MX3005P, MX3000P.
添加Dye ROX B(50×):Applied Biosystems 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast, StepOne, StepOnePlus
三步法荧光定量PCR
步骤 | 温度 | 时间 |
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预变性 | 95℃ | 30 s |
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变性 | 95℃ | 10 s | 35-40 个循环 |
退火 | 56-64℃ 1) | 10 s |
延伸 | 72℃ | 30 s 2) |
注意:
1)无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度。
2)对于300bp以内的片段,延伸时间30s即可,200bp以内的片段,延伸时间20s即可。