EBY100菌株是Invitrogen公司开发的酵母展示用菌株,MATa型,与pYD1质粒配套使用,可直接转化质粒进行蛋白展示试验;Transformation marker为:leu2,trp1。EBY100-pYD1酵母展示系统通过酿酒酵母的a凝集素受体(a-agglutinin receptor)将目标蛋白展示在细胞表面,方便后期筛选。其基本原理为:a凝集素受体由AGA1和AGA2两个亚基组成,AGA1蛋白(725个氨基酸)由EBY100细胞合成,分泌到细胞外,在细胞外基质中与酵母细胞壁的β-葡聚糖共价结合,AGA2蛋白(69个氨基酸)可以通过两个二硫键结合到AGA1蛋白上;将目标蛋白构建到pYD1质粒上,与AGA2蛋白融合表达,AGA2蛋白在N端,目标蛋白在C端,当含有pYD1质粒的 EBY100 酵母菌在含有半乳糖,同时不含葡萄糖的培养基中诱导表达时可以表达出AGA2-target protein 融合蛋白,该融合蛋白通过AGA2结合到EBY100酵母细胞表面的AGA1蛋白上进而将目标蛋白展示在酵母表面。EBY100感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,pGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。
基 因 型:MATa AGA1::GAL1-AGA1::URA3 ura3-52 trp1 leu2-delta200 his3-delta200 pep4::HIS3 prbd1.6R can1 GAL