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产品名称:BL21(AI)感受态细胞 BL21(AI) Chemically Competent Cell(ZC1206)

货号 规格 价格 订购数量 是否现货
ZC1206-1 100μl×10支 400 - + 有货
ZC1206-2 100μl×20支 700 - + 有货


产品介绍:

本公司生产的BL21(AI)感受态细胞是采用特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率高达107cfu/μg DNA以上。                  

基因型为:F- ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA


产品特点:

BL21(AI)是大肠杆菌B/r型菌株(E.coli B/r)。BL21(AI) 来源于BL21菌株,为Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株,这两种酶的缺失有效防止异源蛋白在大肠杆菌体内的降解。在培养基中添加L-阿拉伯糖可诱导araBAD启动子下游T7RNA聚合酶的表达进而促进目的蛋白的表达。在培养基中添加葡萄糖可抑制araBAD启动子下游T7RNA聚合酶的表达进而抑制目的蛋白的表达。BL21(AI) 感受态细胞适用于任何以T7启动子为基础的表达载体,能够进行高水平的重组蛋白表达。因为菌株能够对体内的T7 RNA聚合酶水平进行高效调节,BL21(AI) 感受态细胞能够表达对其他BL21细胞有毒性或抑制生长的蛋白。普通重组蛋白在BL21(AI) 菌株中获得产量和其他BL21菌株产量相当;对大部分毒性蛋白,在BL21(AI) 菌株中获得的产量高于BL21(DE3)pLysS菌株或BL21(DE3)菌株。


■ 蛋白小量诱导表达参考步骤:

1. 小摇接种:挑取单克隆菌落接种至5mL含相应抗生素的液体LB(或2YT、TB、SB等营养丰富培养基),37℃,200 rpm过夜摇菌约10-15h。

2. 大摇接菌:将小摇的菌液按1-2%比例接菌到50mL含相应抗生素的LB(或2YT、TB、SB等营养丰富培养基),为增加溶氧推荐使用500mL三角瓶(加入营养液的体积一般为三角瓶标定体积的1/10,最高不超过1/5)。 37℃,150 rpm摇菌到OD600值为0.5-0.8(一般需要2-4h)。

3. 在三角瓶中加入IPTG至终浓度为1mM(IPTG浓度可自由调整,可调节范围为0.1-20mM),加入过滤除菌的L-阿拉伯糖母液至终浓度为0.2%(L-阿拉伯糖浓度的可调节范围为0.05%-0.5%),继续37℃,120 rpm摇菌2-4h(也可30℃培养6-12h)。    

4. 阶段取样(选做步骤):最佳摇菌时间与所表达蛋白有关,表达蛋白不同最佳摇菌时间不同,为找到最佳诱导时间可在不同诱导时间点取样(可在诱导第2h,4h,6h,8h,14h取样,离心后放-20℃保存)。

5. 离心收菌:三角瓶从摇床拿出,冰浴10 min, 4℃,5000g,离心10min,弃上清,沉淀保存在-20℃,后续可用于SDS-PAGE分析蛋白表达。





■ 应用

能够表达对其他BL21细胞有毒性或抑制生长的蛋白



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