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产品名称:DH10Bac菌株(ZK223)

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ZK223 0.3ml/支 600 - + 有货

■ 产品介绍

DH10Bac感受态细胞是用来生产用于真核细胞蛋白表达的重组杆状病毒分子。

DH10Bac菌株含有父Bacmid的bMON14272和辅助质粒pMON7124。父Bacmid的包含一个小型F复制子,卡钠霉素抗性基因,attTn7重组位点和lacZα互补因子。辅助质粒包含的tnsABCD的区域,提供了转座蛋白,这些转座蛋白可以供体质粒(Donor plasmid)上的小Tn7位点插入到父本Bacmid的重组目的位点。辅助质粒pMON7124包含有四环素抗性(Tetracycline)。

DH10Bac感受态细胞本身含有卡那霉素和四环素抗性。在制作感受态细胞的时候,需要加入这两种抗生素,以防止DH10Bac中的质粒父本杆粒bMON14272(卡那霉素抗性)和辅助质粒pMON7124(四环素抗性)在细胞扩增过程中丢失,提高质粒转化后的基因转座效率。

基因型为:F-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galKλ- rpsL nupG/pMON14272/pMON7124


■ 产品特点

携带Tn7转座元件的供体质粒pFastBac,含有庆大霉素抗性基因,杆状病毒多角体启动子,一个多克隆位点区域和SV40的poolyadenylation信号。重组的Bacmid分子通过将多克隆位点包含有基因编码序列的供体质粒pFastBa质粒DH10Ba感受态细胞转化与在编码序列克隆到多个克隆网站(重组成功的质粒在选择性培养基平板上呈现为白色菌落)。然后可以将重组Bacmid进行挑菌,小量提取分离并且转染到昆虫细胞,从而进行感染重组杆状病毒颗粒生产。

高效DH10Ba感受态细胞的能够有效抵抗连接酶和连接酶缓冲液,同时可以容忍少量未稀释的连接反应。φ80dlacZDM15标记可以利用Bacmid载体中的β-半乳糖苷酶基因α-互补使用含X-gal平板培养基的蓝白斑菌落筛选。

综上所述,DH10Bac感受态细胞本身含有卡那霉素和四环素抗性,而供体质粒pFastbac含有庆大霉素的抗性,所以在制备DH10Bac感受态细胞时需要在培养时添加卡那霉素和四环素,而在制备杆粒时需要使用卡那霉素,四环素,庆大霉素的三抗平板。