■ 产品介绍
BL21-Gold菌株来源于Stratagene公司的BL21菌株，缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，减少对重组蛋白的降解。BL21-Gold菌株的染色体中整合了一个有功能的Dcm甲基化酶，可以促进质粒的稳定，防止被自身的限制酶系统降解；引入了Hte基因，可以提高转化效率； 缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒DNA的产量、质量和稳定性。BL21-Gold菌株不含T7 RNA聚合酶，在不引入外源T7 RNA聚合酶时不能用于由T7启动子驱动的蛋白表达 (如：pET系列)；含有大肠杆菌RNA聚合酶，可以用于tac或trc等使用大肠杆菌RNA聚合酶的原核系统的表达 (如：pGEX，pMAL质粒)；通过感染CE6噬菌体可将T7 RNA聚合酶引入BL21-Gold，诱导T7启动子驱动的蛋白表达 (如：pET系列)，这种方法完全没有泄漏表达，可以用于表达毒性基因。BL21-Gold感受态细胞具有四环素抗性，由特殊工艺制作，使用pUC19质粒检测，转化效率高达108cfu/μg DNA以上。
基因型为：E. coli B F- ompT hsdS(rB- mB- ) dcm+ Tet r gal endA Hte
■ 操作步骤:
以下操作均按无菌条件的标准进行
转化:取感受态细胞置于冰浴中(解冻1-2分钟),加入目的DNA,轻轻混匀，在冰浴中放置30分钟。
注意:所使用 DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的1/10,100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和。
热激:将离心管置于42°C水浴中放置60-90秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3分钟，该过程不要摇动离心管。
复苏:向每个离心管中加入500μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37°C 180rpm摇床振荡培养45-60分钟，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
涂板:根据实验要求(质粒，重组连接产物转化)，吸取适量体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37°C培养12-16小时。
