■ 产品简介
P19蛋白来源于番茄丛矮病毒，可抑制宿主对外源基因的RNA沉默效应，提高异源基因转录本的稳定性，进而促进异源蛋白的表达，广泛应用于转基因植物及烟草叶片，拟南芥叶片，番茄叶片或原生质体的瞬时表达系统中。发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。K599发根农杆菌（NCPPB2659）含有pRi2659农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（葫芦科，豆科，茄科等），同时具有链霉素抗性。在K599菌株中转入help质粒：pSoup-p19即为K599((pSoup-p19)菌株，可帮助pGreen，62SK，pGs2系列质粒在农杆菌中复制，同时赋予该菌株四环素（tet）抗性。本公司生产的K599((pSoup-p19)化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pGs2质粒（4445bp，KanR）检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
基因型：Agrobacterium rhizogenes (strR) pRi2659 (agropine type)(pSoup-p19-tetR)
■ 操作步骤:(冻融法)
以下步骤均按无菌条件的标准进行:
1、取-70°C保存的农杆菌感受态于室温或冰水浴片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰浴中。
2、每100μl感受态加1μg质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37°C水浴5分钟、冰浴5分钟。
3、加入800μl TY液体培养基，于28°C振荡培养2~3小时。
4、5000rpm离心1min收菌，留取100ul左右上清，轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的TY平板上，倒置放于28°C培养箱培养2-3天。
提示:
刚刚化冻的细胞，转化效率最高。
感受态细胞应保存在-70°C，应避免反复冻融，以免降低感受态细胞的转化效率。进行转化操作时，请在无菌条件下，根据相应温度要求进行实验。
加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降;质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。
该菌株具有链霉素和四环素抗性，不可用于具有链霉素和四环素抗性质粒的转化。
K599菌株最好使用TY培养基，若使用LB培养基，在抗生素筛选时平板底部容易产生一层菌膜。
K599菌株对壮观霉素不敏感，若转化壮观霉素抗性的质粒，必须使用TY培养基，同时壮观霉素使用浓度为100-150μg/ml，壮观霉素浓度低于100μg/ml时，会产生糊板现象，很难长出阳性菌落；壮观霉素浓度为100-150μg/ml时，会长出正常的阳性菌落，此时平板底部可能会有一薄层菌膜，这是正常现象，不影响试验，挑菌时挑阳性菌落即可。
■ 培养基配方:
TY配方(1L):
Tryptone 5g
Yeast extract 3g
补水到1L体积,完全溶解后，121°C、20min高温灭菌
配制1M的氯化钙水溶液，121°C、20min高温灭菌
每1L灭菌的TY 液体营养液中加入10ml无菌的1M氯化钙水溶液即可。
若配制TY固体培养基，则加入15g琼脂粉。
