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产品名称:NMY51菌株(ZK286)

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ZK286 0.3ml/支 975 - + 有货

■ 产品介绍

DUALmembrane系统是DUALsystems BioTech公司开发的专门筛选跨膜蛋白间相互作用的检测技术,它利用分离的泛素系统(split-ubiquitin)直接检测天然状态下膜蛋白间的相互作用,是目前市面上唯一检测膜蛋白间相互作用的酵母双杂系统。此系统采用NMY51酵母菌株,可直接转化质粒进行蛋白互作验证或筛库试验;此菌株Transformation marker为: trp1,leu2-3,报告基因为:HIS3,ADE2和lacZ,第一步通过营养缺陷型报告基因(HIS3,ADE2)进行选择性生长筛选,进一步通过LacZ报告基因进行β-半乳糖分析显色的定量或半定量筛选,三个独立的报告基因,受不同启动子的调控,降低假阳性几率。原理:泛素(ubiquitin)分子量很小,由76aa残基组成;泛素作为降解信号分子,可以连接另外一种蛋白质的N端,然后被泛素专一性蛋白酶(UBPs)识别,从而导致与泛素相连的蛋白被酶解。泛素可以人为分成两部分:N端(Nub),C端(Cub)。首先,人为地将泛素Nub的3位异亮氨酸突变为甘氨酸(NubI突变为 NubG)。这样与Cub的亲合力大大降低,避免了Cub和Nub自我结合或接近的可能性。其次,将Cub 部分与人工合成的 LexA-VP16 转录激活因子融合成一个融合蛋白Cub-LexA-VP16。正常条件下 NubG不与Cub 结合,UBPs也不能识别分离的泛素,转录激活因子也不会被切下来。最后,将要检测的蛋白质分别与NubG和Cub融合,形成bait融合蛋(bait-cub-LexA -VP16)和prey融合蛋白(prey-NubG)。如果bait和prey发生相互作用,就会促使NubG和Cub的相互接近,被UBPs识别,导致 LexA-VP16的解离,进入核内,从而激活报告基因的转录。此系统可使用四种Bait质粒:pBT3-N,pBT3-SUC,pBT3-STE,pBT3-C,筛选标志均为LEU;三种Prey质粒:pPR3-C,pPR3-SUC,pPR3-STE,筛选标志均为TRP。NMY51酵母菌株可用YPDA在28℃有氧的条件下培养,然后使用30%的甘油保藏菌种。

基因型为:MATahis3Δ200trp1-901leu2-3,112ade2LYS2::(lexAop)4-HIS3ura3::(lexAop)8-lacZ ade2::(lexAop) 8-ADE2 GAL4


■ 基本信息

培养基:YPD/YPDA

菌株类别:酵母菌

培养条件:28℃,有氧,YPD/YPDA

质粒转化:化转/电转

保存方式:30%甘油,-80℃

基本应用:酵母双杂交