■ 产品组成
试剂盒组成
| ZPM202-1 50T
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Oligo(dT) beads(10 mg/mL)
| 1 mL
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mRNA Lysis Buffer (LB)
| 25 mL
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50×DTT
| 0.5 mL
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mRNA Bind Buffer(BB)
| 15 mL
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mRNA Wash Buffer 1(WB1)
| 25 mL
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mRNA Wash Buffer 2(WB2)
| 50 mL
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RNase Free ddH2O
| 15 mL
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说明书
| 一份
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■ 产品简介
本试剂盒适用于从培养细胞、动物组织或纯化的总RNA中，快速分离获得高完整性、高纯度的信使RNA（mRNA）。纯化产物可不经额外沉淀浓缩，直接用于cDNA文库构建、高通量测序、基因表达分析、RT-PCR、Northern印迹及微阵列等下游分子生物学实验，还可用于mRNA疫苗的研发，如mRNA疫苗的纯化等。
试剂盒的核心元件为表面共价偶联Oligo(dT)序列的顺磁性磁珠。绝大多数真核 mRNA的3′末端带有Poly(A)尾，当样品与磁珠在适宜的盐离子条件下共孵育时，磁珠上的Oligo(dT)即与mRNA的Poly(A)尾通过碱基互补配对形成稳定的杂交体，从而将mRNA特异性地锚定在固相载体上；本身不含Poly(A)尾的核糖体RNA（rRNA)、转运RNA（tRNA）及大部分基因组DNA不能与磁珠结合，可在后续洗涤步骤中被有效去除。随后以低盐的洗脱液和加热的方式使杂交体解链，即获得纯净的mRNA。
■ 实验数据
1.从细胞样品中提取纯化mRNA
分别使用超快动物组织/细胞RNA提取试剂盒(ZP441)和mRNA纯化试剂盒(磁珠法) (ZPM202)提取293细胞总RNA和mRNA，然后使用第一链反转录试剂盒（ZR102）和2×HQSYBR qPCR Mix荧光定量试剂（ZF501）进行qRT-PCR检测，使用FOS引物对比CT值见上图，可见mRNA略小于总RNA，说明本试剂盒对细胞裂解和mRNA纯化效率极高。
2.从总RNA中分离纯化mRNA
使用mRNA纯化试剂盒(磁珠法) (ZPM202)分离纯化293总RNA中的mRNA，然后使用第一链反转录试剂盒（ZR102）和2×HQSYBR qPCR Mix荧光定量试剂（ZF501）进行qRT-PCR检测，使用FOS引物对比CT值见上图，可见mRNA纯化前后的CT值基本一致，说明mRNA的纯化效率接近100%。
