本产品为预混的含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、反应缓冲液、mg2+、PCR反应增强剂以及稳定剂等成分的2×PCR体系,使用时只需加入DNA模板和引物,并用水补足体积。本产品具有快速简单、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可最大限度地减少人为误差、节约PCR实验操作时间、降低污染几率。不含有染料,在PCR反应完成后,产物需添加上样缓冲液即可直接进行电泳,也可纯化回收后用于酶切、克隆、测序等后续反应。选用的Pfu DNA聚合酶具有比Taq酶更高的耐热活性,98℃时1小时后可保留90%以上的酶活性。具有5’-3’ DNA聚合酶活性和3’-5’外切核酸酶活性(校正活性),pfu酶是目前已发现的所有耐高温DNA Polymerase中出错率最低的。在PCR反应中,pfu DNA Polymerase延伸速度为0.5-1 kb/分钟,产物3’端为平端,可用平端载体克隆。
■ 适用范围
1.高保真基因克隆:如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变分析(SNP)和平末端补平等。
2.复杂DNA模板(如GC含量高,二级结构)的扩增。
3.PCR产物3 ’端附没有突出的“ A ”碱基,纯化后可用于平端克 隆;若用于T/A克隆,需加A后方可使用。
4.大量高保真需求的基因克隆:如cDNA文库的建立等。
■ 质量控制
经检测无外源核酸酶活性;PCR方法检测无宿主残余 DNA ;能有效地扩增人基因中的单拷贝基因;室温存放一周,无明显活性改变。