许多高温DNA聚合酶,如Taq DNA聚合酶、Tth DNA聚合酶等扩增的PCR产物在3’-末端后都带有一个突出的碱基"A",这样的PCR产物可以用3’-末端后带有一个突出碱基"T"的载体方便地进行克隆。pBLUE-T 载体来源于pBlueScript II SK(+) 质粒,在EcoRI酶切位点处添加了适当序列,经Xcm I 酶切后其3’末端直接产生未配对的"T"碱基而成,因此有更高的重组效率。pBLUE-T 载体插入位点两端独特设计的两个EcoR I位点使插入片段可以用廉价高效的EcoR I单酶切检测; 同时pBLUE-T 载体不含NdeI或NcoI限制性内切酶位点,可方便用于克隆含上述酶切位点的基因。此外,本公司载体连接体系还有背景低(蓝斑小于10%),重组率高(白斑中超过90%有插入片段),可快速连接等特点。本说明书末列出了pBLUE-T 载体相关的技术资料,其全序列可参照pBlueScript II SK(+)序列,只是其多克隆酶切位点处序列稍有不同。
■ 产品亮点
★实现5-10min快连,无需过夜
★需要蓝白斑筛选
★蓝斑率低于10%
★重组率高,克隆效率高达90%
★可5ul体系连接,连接效率不变
★适合Taq、Tth等系列产物的克隆
★可使用M13、T7、T3启动子引物测序
★多克隆位点丰富便于重组表达基因的亚克隆
■ 储存
保存:-20℃至少保存1年。
■ pBLUE-T载体测序引物序列
M13F: TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R: CAGGAAACAGCTATGACC
■ pBLUE-T载体图谱
■ pBLUE-T载体多克隆位点序列