■ 产品简介
Carrier DNA (又名鲑鱼精DNA) 为短的线形单链DNA,可包裹质粒DNA,在酵母细胞摄取外源质粒DNA过程中发挥作用,促进质粒进入酵母细胞,另外还可保护质粒免于被DNA酶降解。在每次使用前务必进行两次热变性,保证Carrier DNA在转化实验体系中以单链形式存在。Carrier DNA是酵母感受态细胞转化所必需的配套试剂,每个转化反应需要10µl Carrier DNA。
■ 操作方法
1.Carrier DNA在每次使用前要通过加热处理使其变性为单链状态,步骤如下:Carrier DNA放95℃水浴或金属浴3min,快速插入冰中,静置3min,再次放95℃水浴或金属浴3min,快速插入冰中,静置3min以上。
2.取100µl冰上融化的酵母感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5µg,Carrier DNA 10µl,PEG/LiAc(酵母转化试剂ZC1600)500µl并吸打几次混匀,30℃水浴30min (15min时翻转6-8次混匀)。
3.将管放42℃水浴15min (7.5min时翻转6-8次混匀)。
4.5000rpm离心 40s弃上清,ddH2O 400µl 重悬,离心 30s弃上清。
5.ddH2O 50µl重悬,涂板,29℃培养48-96h。
■ 注意事项
1.在每次使用前务必进行两次热变性,保证Carrier DNA在转化实验体系中以单链形式存在。
2.Carrier DNA 可在4℃短时间保存,如需长时间保存请放-20℃。