产品说明:
本产品主要用于酿酒酵母感受态细胞的转化实验。PEG/LiAC 有利于酵母细胞吸收质粒DNA,从而提高酵母的转化效率。
使用方法:
1.5mL体系:
1. 在含有约100ng质粒的1.5mL无菌离心管中,加入5uL预变性的 Carrier DNA,50uL酵母感受态细胞,500uL LiAc/PEG3350混合液轻柔混匀。
2. 30℃水浴30 min,每10 min 混匀一次。
3. 每管加入20 uL DMSO,轻柔混匀。
4. 42℃水浴热激15 min,每5 min上下颠倒混匀一次。
5. 700 g离心5min。
6. 弃掉上清,用1 ml YPD Plus液体培养基重新悬浮,30℃摇床震荡培养30-60min。
7. 700 g 离心5min。加入0.5mL无菌0.9%NaCl重悬菌体。
8. 涂布于相应的缺陷型培养基上。
9. 30℃恒温培养3-5天。
15mL体系:
1. 在含有约5-15ug质粒的15mL无菌离心管中,加入20uL预变性的 Carrier DNA,600uL酵母感受态细胞,2.5mLLiAc/PEG3350混合液轻柔混匀。
2. 30℃水浴 45 min,每10 min 混匀一次。
3. 每管加入160uL DMSO,轻柔混匀。
4. 42℃水浴热激20 min,每5 min 上下颠倒混匀一次。
5. 700 g 离心5min。
6. 弃掉上清,用3 ml YPD Plus 液体培养基重新悬浮,30℃摇床震荡培养90min。
7. 700 g 离心5min。加入15mL无菌0.9%NaCl重悬菌体。
8. 分别稀释10倍,100倍后涂布于相应的缺陷型培养基上。
9. 30℃恒温培养3-5天。
注意事项:
1. 注意无菌操作,避免微生物污染。
2. 酵母制备过程中尽量在冰上操作,以提高感受态的转化效率。