DNA片段连接往往用于基因操作过程。传统T4 DNA Ligase连接方法连接时间长达16小时,而且反应常常受到DNA末端结构的影响。我公司的Quick DNA Ligation Kit 通过改造T4 DNA Ligase及其相应的缓冲体系,达到完美的高速高效连接;将反应时间缩短在5-10min,并且不受DNA末端结构的影响。
■ 产品特点
·实现5min快速连接。
·连接效率高。
·不受DNA末端结构影响,适用广泛。
建议反应体系(10μl反应体系):
名称
| 加入量
|
Vector
| xμL*1
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PCR产物或酶切产物
| yμL*2
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ddH2O
| 补足至7μL
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5×Quick Ligation Buffer
| 2μL
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T4 DNA Ligase ( 5 Weiss Units/μL )
| 1μL*3
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注解:*1:一般载体加入量为10-100ng。
*2:片段与载体摩尔比在3:1~7:1之间,连接效果最好。
*3:T4 DNA Ligase应最后加入反应体系。
如果使用5ul体系连接,各成分按照比例减半使用,连接效率不变。
加完试剂后,用移液器轻轻吹打混匀或者轻弹管底混匀,低速瞬时离心收集所有液体在离心管底。
室温(20℃-30℃)连接5分钟。