产品简介:
本产品是专用于染料法(SYBR GreenⅠ)实时荧光定量PCR 的预混体系。2×浓度,操作简单方便;新一代的高效热启动酶,针对qPCR优化的PCR buffer与增强剂,使本产品特异性强,灵敏度高,在宽广的模板浓度范围可以得到良好的标准曲线,定量准确,重复性好,可信度高。
适用机型:
ABI Prism 7000/7300/7700/7900, ABI Step One, ABI Step One Plus, ABI 7900HT, ABI 7900HT Fast
三步法荧光定量PCR
步骤 | 温度 | 时间 |
|
预变性 | 95℃ | 30 s |
|
变性 | 95℃ | 10 s | 35-40 个循环 |
退火 | 56-64℃ 1) | 10 s |
延伸 | 72℃ | 30 s 2) |
融解曲线分析 3) |
|
|
|
| 95℃ | 15 s |
|
| 60℃ | 1 min |
|
| 95℃ | 15 s |
|
| 60℃ | 15 s |
|
注意:
1)无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度。
2)对于300bp以内的片段,延伸时间30s即可,200bp以内的片段,延伸时间20s即可。
3)本说明是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定,融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定。