■ 产品简介
SMD1168H是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。SMD1168H被推荐用来表达含有Zeocin抗性的酵母表达载体重组质粒，例如pPICZ A, B, C系列的载体。SMD1168H基因组中的Pep4基因发生突变，造成蛋白水解酶A活性的丧失，可以保护表达产物免受降解，促进表达量的提高。SMD1168H毕赤酵母适宜的生长温度是28-30℃，一般使用30℃培养，温度超过32℃可能导致细胞的死亡。
基因型：pep4；表型：pep4-, Mut+
■ 操作方法
1.取需转化质粒5µg，酶切，回收；
2.取一支无菌的1.5ml EP管，依次加入预冷的线性质粒1-5µg（体积不高于15µl），酵母促转化剂10µl，100µl冰上融化的SMD1168H感受态细胞，加入B液（转化剂）1.4ml，轻轻翻转混匀6-8 次。
3.30℃水浴60min，每30min轻轻翻转混匀6-8次。
4.42℃水浴20min，每10min轻轻翻转混匀6-8次。
5.12000rpm瞬时离心弃上清，每支加1ml的YPG Plus（或YPG）于30℃复苏1h（用于提高转化效率，也可不做）。
6.12000rpm瞬时离心弃上清，加入1ml C液（悬浮剂）重悬。
7.12000rpm瞬时离心弃上清，用100µl C液（悬浮剂）重悬，涂板，30℃培养 3-7d。
■ 注意事项
1.使用 Carrier DNA（酵母促转化剂）前，请把管子在沸水中煮沸5min或金属浴100℃处理10min，然后立即放在冰上2-3min，使用后于-20℃储存备用。
2.转化液低温环境下会析出，请于常温下完全溶解后使用。
3.Zeocin/博莱霉素正常使用浓度为100μg/ml（适当降低浓度至70μg/ml可增加菌落数并缩短筛选周期），筛选高拷贝整合转化子可增加抗生素浓度。
4.12000rpm瞬时离心指离心速度升到12000rpm立即停止离心。
