■ 产品简介
本公司生产的BLR(DE3)pLysS感受态细胞是采用特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率高达107cfu/μg DNA以上。
基因型为：F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm(DE3)pLysSRARE2(CamR)
■产品特点
BLR(DE3)pLysS是BLR(DE3)菌株的衍生菌株，recA突变有利于原核表达质粒的稳定（适合含有不稳定DNA或重复DNA序列的基因的蛋白表达）。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，整合于大肠杆菌的染色体上），可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。该菌株携带的pLysS质粒含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。BLR(DE3)pLysS菌株具有四环素，氯霉素抗性。
■操作步骤
以下操作均按无菌条件的标准进行:
■ 转化：取感受态细胞置于冰浴中（解冻1-2分钟），加入目的DNA，轻轻混匀，在冰浴中放置30分钟。
注意：所使用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的1/10。
■ 热激：将离心管置于42℃水浴中放置60-90秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3
分钟，该过程不要摇动离心管。
■ 复苏：向每个离心管中加入500μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃180rpm
摇床振荡培养45-60分钟，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
■ 涂板：根据实验要求（质粒，重组连接产物转化），吸取适量体积已转化的感受态细胞加到含相
应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体
被吸收，倒置平板，37℃培养12-16小时。
■提示:
· 刚刚化冻的细胞，转化效率最高。化冻后感受态细胞冰浴条件下，半小时内活性无明显变化，因
此，同时转化多支感受态细胞时尽量半小时内加完目的DNA。
· 感受态细胞应保存在-70℃，请避免反复冻融，以免降低感受态细胞的转化效率。
· 进行转化操作时，请在无菌条件下，根据相应温度要求进行实验。
· 避免用移液枪吹吸，整个过程要轻柔，尽量低温操作。
· 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。
· 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
· 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2 mM均可）。
· 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
· BLR(DE3)pLysS菌株携带pLysSRARE2质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、
培养液均应含有34µg/ml 氯霉素，以防质粒丢失。
