■ 产品介绍
DUALmembrane系统是DUALsystems BioTech公司开发的专门筛选跨膜蛋白间相互作用的检测技术，它利用分离的泛素系统（split-ubiquitin）直接检测天然状态下膜蛋白间的相互作用，是目前市面上唯一检测膜蛋白间相互作用的酵母双杂系统。此系统采用NMY51酵母菌株，可直接转化质粒进行蛋白互作验证或筛库试验；此菌株Transformation marker为: trp1，leu2-3，报告基因为：HIS3，ADE2和lacZ，第一步通过营养缺陷型报告基因（HIS3，ADE2）进行选择性生长筛选，进一步通过LacZ报告基因进行β-半乳糖分析显色的定量或半定量筛选，三个独立的报告基因，受不同启动子的调控，降低假阳性几率。原理：泛素（ubiquitin）分子量很小，由76aa残基组成；泛素作为降解信号分子，可以连接另外一种蛋白质的N端，然后被泛素专一性蛋白酶（UBPs）识别，从而导致与泛素相连的蛋白被酶解。泛素可以人为分成两部分：N端（Nub），C端（Cub）。首先，人为地将泛素Nub的3位异亮氨酸突变为甘氨酸（NubI突变为 NubG）。这样与Cub的亲合力大大降低，避免了Cub和Nub自我结合或接近的可能性。其次，将Cub 部分与人工合成的 LexA-VP16 转录激活因子融合成一个融合蛋白Cub-LexA-VP16。正常条件下 NubG不与Cub 结合，UBPs也不能识别分离的泛素，转录激活因子也不会被切下来。最后，将要检测的蛋白质分别与NubG和Cub融合，形成bait融合蛋（bait-cub-LexA -VP16）和prey融合蛋白（prey-NubG）。如果bait和prey发生相互作用，就会促使NubG和Cub的相互接近，被UBPs识别，导致 LexA-VP16的解离，进入核内，从而激活报告基因的转录。此系统可使用四种Bait质粒：pBT3-N，pBT3-SUC，pBT3-STE，pBT3-C，筛选标志均为LEU；三种Prey质粒：pPR3-C，pPR3-SUC，pPR3-STE，筛选标志均为TRP。NMY51酵母菌株可用YPDA在28℃有氧的条件下培养，然后使用30%的甘油保藏菌种。 |
基因型： | MATahis3Δ200trp1-901leu2-3,112ade2LYS2::(lexAop)4-HIS3ura3::(lexAop)8-lacZ ade2::(lexAop) 8-ADE2 GAL4 |
■ 基本信息
培养基: | YPD/YPDA |
菌株类别: | 酵母菌 |
培养条件: | 28℃，有氧，YPD/YPDA |
质粒转化: | 化转/电转 |
保存方式: | 30%甘油，-80℃ |
基本应用: | 酵母双杂交 |
■ 使用方法
收到菌液及时四区划线活化，挑取单克隆在YPD中培养到生长对数中后期加入终浓度30%无菌甘油保种，分装置于-80℃保存，避免反复化冻。建议超净台内划线涂板，避免杂菌污染。
■ 注意事项
1. 酵母菌在YPD培养基上会变粉，是正常现象，可以由此特性鉴别是否为酵母菌。
2. 酵母菌种化冻1-2次活性下降，不建议直接长期保存。
3. 活化保种的种管建议分装保存，反复冻融菌株活力下降。
4. 本产品仅可用于实验室研究，不能用于动物，人体以及作为食品添加剂等用途。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
