■ 基本信息
别名: | pET28a |
启动子: | T7 |
复制子: | pBR322 |
终止子: | T7 terminator |
质粒分类: | 大肠系列质粒；大肠表达质粒；pET系列质粒 |
质粒大小: | 5369bp |
质粒标签: | N-6×His, N-Thrombin, N-T7, C-6×His |
原核抗性: | Kan |
克隆菌株: | DH5a |
培养条件: | 37℃，有氧，LB |
表达宿主: | 大肠杆菌BL21(DE3) |
诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
5'测序引物: | T7：TAATACGACTCACTATAGGG |
3'测序引物: | T7-ter：TGCTAGTTATTGCTCAGCGG |
■ 质粒属性
质粒宿主: | 大肠杆菌 |
质粒用途: | 蛋白表达 |
片段类型: | ORF
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片段物种: | 空载体
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原核抗性: | Kan |
真核抗性: |
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荧光标记: |
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■ 质粒简介
pET-28a质粒是一种原核表达载体，C端含有一个6×His标签，N端含有6×His标签、thrombin酶切位点、T7标签。该质粒含有多个常用的酶切位点，便于不同基因克隆。表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导，目的基因被克隆到质粒载体上，受噬菌体强转录及翻译信号控制。pET28a载体的单一的多克隆位点见上面的环状质粒图谱。注意：载体序列是以pBR322质粒的编码规矩进行编码的，所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面是反向的。T7 RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列的作用下终止蛋白翻译。pET系统是有史以来在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能最强大的系统，也是现今原核表达方面使用最广泛的系统。该系列质粒能很容易的通过降低诱导物的浓度来削弱蛋白表达。在非诱导条件下，可以使目的基因处于完全沉默状态而不转录。 质粒只保证关键序列正确，不保证表达效果。
■ 质粒图谱
■ 质粒序列
质粒序列请下载：
ZK159pET-28a大肠表达质粒.txt
