■ 基本信息
启动子: | CMV |
复制子: | pUC |
终止子: | HSV TK poly(A) signal |
质粒分类: | 哺乳细胞质粒；哺乳编辑质粒；干扰RNA质粒 |
质粒大小: | 5759bp |
原核抗性: | Str |
真核抗性: | Blast |
克隆菌株: | DH5a |
培养条件: | 37℃，有氧，5%CO2 |
表达宿主: | 293T等哺乳细胞 |
诱导方式: | 无需诱导 |
5'测序引物: | pEGFP-C-5 |
3'测序引物: | HSVtk-pA-R：GTCTCCTTCCGTGTTTCAG |
备注: | 可连入miRNA片段 |
■ 质粒属性
质粒宿主: | 哺乳细胞 |
质粒用途: | 转录调控 |
片段类型: | miRNA
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片段物种: |
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原核抗性: | Str |
真核抗性: | Blast
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荧光标记: | 绿色
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■ 质粒简介
pCDNA6.2-GW-EmGFP-miR-Control质粒是在pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR线性化载体的基础上连入了一个小片段而成。如果需要连入其它miRNA片段，可通过引物退火加酶切连接的方式连入。 转染后可立即表达 miRNA。 所表达的 miRNA 在核内经内源细胞机制（包括 Drosha 酶）加工后，转运至细胞质，由 Dicer 酶进一步加工）。 然后，完成加工的 miRNA 结合到 RISC，在此处其功能类似于 siRNA，使 mRNA 靶标被切割。
带有 EmGFP 的 BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒将传统 RNAi 载体的优点（表达稳定并能够使用病毒导入）以及组织特异性表达和同一转录本多靶点抑制的功能集于一身。 带有 EmGFP 的 BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒含有的 pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR 载体设计用于表达人工 miRNA，该 miRNA 经工程化改造，与目的基因序列有 100% 的同源性并能引起靶标分子的切割。 该载体包括内源性 miRNA 的侧翼序列和环序列，内源性 miRNA 可指导从较长的 Pol II 转录本 (pre-miRNA) 上切除工程化的 miRNA。 使用 一流的 BLOCK-iT RNAi Designer，超过 70% 的重组体能产生超过 70% 的抑制效率。 工程化 miRNA 的 Pol II 表达可实现：
在 CMV 即刻早期启动子作用下高效表达，可通过 MultiSite Gateway重组选择组织特异性启动子和其它受调控的启动子；
在 pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR 载体中同-顺反子表达 Emerald GFP (EmGFP) 报告基因，使 EmGFP 的表达与目的 miRNA 抑制活性之间具有极强的相关性；
与用于基因表达的多种 Invitrogen Gateway® 目的 (DEST) 载体兼容；包括用于稳定转导分裂细胞、非分裂细胞和原代细胞类型的慢病毒载体，用于染色体单位点整合的 Flp-In™ 系统，以及替代报告基因融合构建体；
可在同一转录本表达的工程化 miRNA 多于一种，从而可同时抑制多个基因并产生合成表型；
■ 质粒图谱
■ 质粒序列
质粒序列请下载：
ZK561pCDNA6.2-GWEmGFP-miR-Control哺乳调控质粒.txt
