■ 基本信息
启动子: | AOX1 |
复制子: | pBR322 |
质粒分类: | 酵母系列，毕赤酵母表达载体 |
质粒大小: | 9276bp |
原核抗性: | Amp,Kan |
真核抗性: | HIS4,G418 |
克隆菌株: | DH5a |
培养条件: | 37度 |
表达宿主: | 酵母细胞 |
5'测序引物: | 5´AOX:GACTGGTTCCAATTGACAAGC |
3'测序引物: | 3´AOX:GGCAAATGGCATTCTGACAT |
备注: | 利用alpha分泌因子，分泌表达蛋白。 |
■ 质粒属性
质粒宿主: | 酵母菌 |
质粒用途: | 蛋白表达 |
片段类型: |
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片段物种: |
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原核抗性: | Amp,Kan |
真核抗性: | G418
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荧光标记: |
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■ 质粒简介
pPIC9K载体中存在卡那抗性基因，允许利用卡那抗性在酵母体内筛选多克隆拷贝。
1.载体大小9276 bp。
2.载体构建过程中，可供使用的单一限制性内切酶位点为 SnaB I, EcoR I, Avr II, Not I.
3.利用alpha因子分泌信号肽，分泌表达蛋白基因。
4.在载体构建过程中，你的基因必须保证与信号肽的起始密码子的读码框一致。
5.毕赤酵母中利用HIS4进行筛选。
6.为了将基因插入GS115或KM71的AOX区, 使用SacI限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+Mut+基因型，KM71中产生His+ MutS基因型)
7.为了将基因插入GS115或KM71的His4区, 使用Sal I或者Stu I限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+ Mut+基因型，KM71中产生His+ MutS基因型)
8.将基因插入GS115的AOX1区域，需要使用Bgl II线性化质粒 (产生His+MutS基因型)。
■ 质粒图谱
■ 质粒序列
质粒序列请下载：
ZK922pPIC9k毕赤酵母表达质粒.txt
