■ 基本信息
别名: | pColdSUMO |
启动子: | CSPA |
复制子: | pBR322 |
质粒分类: | 大肠系列质粒；大肠表达质粒；pCold系列质粒 |
质粒大小: | 4740bp |
质粒标签: | N-His, N-SUMO |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培养条件: | 37℃ |
表达宿主: | BL21等大肠杆菌 |
培养条件: | 37℃，有氧，LB |
诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
5'测序引物: | pCold-F（ACGCCATATCGCCGAAAGG） |
3'测序引物:
| pCold-R（GGCAGGGATCTTAGATTCTG） |
备注: | 冷休克表达载体 |
■ 质粒属性
质粒宿主: | 大肠杆菌 |
质粒用途: | 蛋白表达 |
片段类型: | 基因CDS
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片段物种: | 空载体
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原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
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荧光标记: |
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■ 质粒简介
原核表达载体(pCold-SUMO)是在 pCold 载体基础上改造而成，该载体启动子(CS Promoter)来源于南极嗜冷细菌，在低温下(15 度)才能启动蛋白的表达。低温下细菌生长缓慢，使得蛋白合成速度减慢，从而最大限度的提高了蛋白正确折叠的几率，提高了蛋白可溶性表达，增强了活性蛋白的表达比率。该表达系统所包含的 SUMO tag可以极大地提高小分子量蛋白的表达量，而且进一步提高了蛋白的可溶表达几率。TEE信号肽可增强冷启动子调控下目的蛋白的高表达。
pCold-SUMO质粒是利用冷休克基因CSPA启动子设计高效率蛋白质表达载体。在E.COLI启动子下游处，插入了lac操纵子，以便严格控制表达。此外，5’非翻译区（5’UTR），翻译增强元件（TEE）,His标签序列，Xa因子切割位点和多克隆位点（MCS）位于CAPS启动子的下游。当培养温度切换到低温时，大肠杆菌暂时停止生长，大部分的大肠杆菌蛋白质表达减少，但是一类称为冷休克蛋白的蛋白质被特异性诱导表达。
■ 质粒图谱
■ 质粒序列
质粒序列请下载：
ZK1593 pCold-SUMO大肠表达质粒.txt
