■ 基本信息

■ 质粒属性

■ 质粒简介

载体pGRE-Luc可以用来检测GRE信号通路活性。载体pGRE-Luc含有萤火虫来源的荧光 素酶基因。这个载体也包含多拷贝的GRE结合位点序列，并且该序列和一段 TATA-类似启动子（PTAL）融合在一起，PTAL源于单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）启动子。当内源性的GRE蛋白结合到GRE增强元件时，转录起始，报告基因开始表达。 荧光素酶编码序列后有一段 SV40 多聚腺苷酸信号以确保在真核细胞中能正确有效的转录。 在 GRE 结合位点的上游有一段合成的转录抑制区（TB），该区域由多聚腺苷酸信号与转录 终止位点组成，以减少转录背景。该载体骨架也包含了一个f1复制起始区域以便进行单链 DNA 的复制，一个pUC复制起始位点以及一个氨苄抗性基因，便于进行培养筛选。

载体pGRE-Luc用来检测转录因子GRE与GRE增强子的作用，提供了直接检测这条通路活性的途径。该载体可以和一个目的基因的表达载体共转来观察，其是否影响这条通路的活性。 荧光素酶是一种高敏感性的酶原性报告蛋白，适用于任何一种标准的荧光素酶检测法，可以用来定量表达水平。pGRE-Luc载体可以用任何一种标准的方法转染至哺乳动物细胞。为了筛选稳定克隆，转染的载体通常含有抗性筛选基因如：neomycin，hygromycin或者puromycin。

合适的宿主系：DH5α 以及一些其他通用系。进行单链DNA的合成宿主菌需要包含一个 F’ episome，比如 JM109。 筛选标记：质粒为宿主E.coli提供了氨苄抗性（100ug/ml）E.coli 复制起始位点：pUC 拷贝数：~500不相容质粒:pMB1/ColE1。

■ 质粒图谱

■ 质粒序列

质粒序列请下载：

测序所得的部分序列

       1 gaattgttca ggaccagggc gtatctcttc atagccttat gcagttgctc tccagcggtt

      61 ccatcttcca gcggatagaa tggcgccggg cctttcttta tgtttttggc gtcttccatg

     121 gtggctttac caacagtacc ggaatgccaa gcttctgctt catccccgtg gcccgttgct

     181 cgcgtttgct ggcggtgtcc ccggaagaaa tatatttgca tgtctttagt tctatgatga

     241 cacaaacccc gcccagcgtc ttgtcattgg cgaattcgaa cacgcagatg cagtcggggc

     301 ggcagatcta gaacaaaatg taccggtaca ttttgttcta gaacaaaatg taccgctagc

     361 acgcgtaaga gctcggtacc tatcgataga gaaatgttct ggcacctgca cttgcactgg

     421 ggacagccta ttttgctagt ttgttttgtt tcgttttgtt ttgatggaga gcgtatgtta

     481 gtactatcga ttcacacaaa aaaccaacac acagatgtaa tgaaaataaa gatattttat

     541 tgcggccgct ccaagtacct cccgtacctt aatattactt acttatcatg gtagcttggg

     601 ctggcgtaat agcgaagagg cccgcaccga tcgcccttcc caacagttgc gcagcctgaa

     661 tggcgaatgg caaattgtaa gcgttaatat tttgttaaaa ttcgcgttaa atttttgtta

     721 aatcagctca ttttttaacc aataggccga aatcggcaaa atcccttata aatcaaaaga

     781 atagaccgag atagggttga gtgttgttcc agtttggaac aagagtccac tattaaagaa

     841 cgtggactcc aacgtcaaag ggcgaaaaac cgtctatcag ggcgatggcc cactacgtga

     901 accatcaccc taatcaagtt ttttggggtc gaggtgccgt aaagcactaa atc