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基因组DNA提取原理及常见问题分析

发布者:庄盟生物发布时间:2015-04-09浏览次数:2512次

基因组,Genome,一般的定义是单倍体细胞中的全套染色体为一个基因组,或是单倍体细胞中的全部基因为一个基因组。现代遗传学家认为,基因是DNA(脱氧核糖核酸)分子上具有遗传效应的特定核苷酸序列的总称,是具有遗传效应的DNA分子片段。基因位于染色体上,并在染色体上呈线性排列。基因不仅可以通过复制把遗传信息传递给下一代,还可以使遗传信息得到表达。不同人种之间头发、肤色、眼睛、鼻子等不同,是基因差异所致。

利用基因,人们可以改良果蔬品种,提高农作物的品质,更多的转基因植物和动物、食品将问世,人类可能在新世纪里培育出超级物作。通过控制人体的生化特性,人类将能够恢复或修复人体细胞和器官的功能,甚至改变人类的进化过程。

本公司根据不同样品来源(如:细菌、酵母、血液、动物组织、动物细胞、植物组织、植物细胞等),制作了多种提取得率高,纯度好,简单方便的试剂盒。

产品特点

整个实验流程不需要昂贵仪器,不需使用酚氯仿等有毒试剂,能够得到高纯度的大片段基因组DNA,操作简单,可同时处理多个样品。

提取得到的基因组DNA可用于各种方向的分子生物学实验,如:文库构建、基因图谱、Sunthern-Blotting、PCR等。

使用样品

细菌、酵母、血液、动物组织、动物细胞、植物组织、植物细胞等,最好使用新鲜样品,或取样后迅速将样品密封,放于-20℃或-70℃保存,注意避免多次冻融样品,否则将会导致所得基因组DNA的片段变小且提取质量下降。

基因组DNA提取过程中注意事项:

1、因为DNA的一级结构是分子生物研究的基础,所以应尽量保证DNA的完整性。

2、尽量去除多余杂质,如:蛋白、脂类、多糖、有机溶剂等的污染,以确保下游实验的顺利进行。

样品的预处理方式

植物材料:液氮研磨

动物材料:匀浆、液氮研磨

细菌:溶菌酶破壁

酵母:破壁酶,玻璃珠研磨

基因组提取常见问题

◆ 洗涤后硅胶膜上仍有杂质残留:

   细胞裂解不充分, 裂解液和样品要快速充分混匀。

◆ 柱子堵塞:

   1.裂解或匀浆处理不彻底。减少样品使用量,增加裂解液用量,增加匀浆和裂解时间。

   2.处理样品太多。                              

◆ 洗脱产物DNA量很少或没有:

   1.样品中细胞或病毒浓度低。

   2.裂解液和样品混合不均匀造成的细胞裂解不充分。  

   3.蛋白酶K活性下降造成的细胞裂解不充分。      

   4.温浴时间不够造成的细胞裂解不充分或蛋白降解不完全,尽量把组织切成小块,延长温浴时间,使裂解物中没有颗粒状物质残留。

   5.在上柱前,裂解物中没加乙醇,或用低浓度乙醇代替无水乙醇。

   6.DNA没有有效洗脱。提高洗脱效率,可将离心吸附柱加入洗脱液后在室温静置至少1 min,再离心。

   7.洗脱液pH不合适,低pH值会减少DNA产率。确保洗脱液pH值在7.0-8.5之间。

   8.洗脱体积太大,超过200μl洗脱体积所得的DNA浓度会降低,但DNA总量不会减少。

◆ A260/A280 比值较低:

   用水作为洗脱液时,比值偏低。

◆ A260/A280 比值较高:

   大量RNA残留,没有使用RNase A,或RNase A活性下降。

◆ DNA影响后续酶反应实验:

   1.在洗脱液中有残留的漂洗液W1,可通过再次离心去除硅胶膜上的W1。

   2.大量RNA残留。

◆ 缓冲液A、B中有白色沉淀:  

   白色沉淀可能由于低温或长时间放置产生,可在使用前在56℃重新加热溶解。

◆ 操作中加入缓冲液B有白色沉淀:

   缓冲液B加入后产生的白色沉淀在70℃温浴时会消失,不会影响下游操作。