庄盟生物

当前位置:首页 - 技术服务 - 产品常见问题

纯化回收

发布者:庄盟生物发布时间:2015-04-01浏览次数:1460次
■纯化回收简介

采用硅基质材料在高盐条件下特异地与DNA结合,从而去除杂质。在低盐条件下洗脱DNA得到高纯度DNA。本公司所使用的硅基质吸附材料及玻璃奶吸附材料,能够有效的去除蛋白、盐类及有机物质。


凝胶回收常见问题分析
未回收或回收率低
  1. 胶块未全部溶解:溶解凝胶时应置于55℃水浴,期间上下颠倒混匀数次,确定胶块完全溶解后再进行下一步骤。
  2. 胶块太大(>400 mg):如果需要处理的胶块太大,应先将其切成小块,然后分两次回收。
  3. 电泳缓冲液pH值太高:硅胶膜在高盐及低pH值(pH≤7.5)时可结合DNA,在低盐及高pH值(pH≥8)条件下洗脱。如果电泳缓冲液pH值太高,会导致DNA无法结合或降低结合率。可在溶胶后加入3M乙酸钠(pH 5.0)10μl,将pH值调至7.5以下。
  4. 漂洗液中未加无水乙醇:第一次使用前应在漂洗液中加入无水乙醇。漂洗液每次用后应拧紧瓶盖,以免乙醇挥发,降低回收率。
  5. 洗脱缓冲液不合适:DNA只在低盐溶液中才能被洗脱,如试剂盒中的洗脱缓冲液TE (10 mM Tris·Cl, pH 8.5)或水。洗脱效率还与pH值有关。最大洗脱效率在pH 7.08.5间。当用水洗脱时请确保其pH值在此范围内。
  6. 洗脱缓冲液未加在离心柱中间,尤其使用较少量洗脱缓冲液时:应滴加在离心柱正中间,并放置12分钟,再离心。