纯化回收
发布者：庄盟生物发布时间：2015-04-01浏览次数：7375次
■纯化回收简介
采用硅基质材料在高盐条件下特异地与DNA结合，从而去除杂质。在低盐条件下洗脱DNA得到高纯度DNA。本公司所使用的硅基质吸附材料及玻璃奶吸附材料，能够有效的去除蛋白、盐类及有机物质。
■凝胶回收常见问题分析
未回收或回收率低
1. 胶块未全部溶解：溶解凝胶时应置于55℃水浴，期间上下颠倒混匀数次，确定胶块完全溶解后再进行下一步骤。
2. 胶块太大（>400 mg）：如果需要处理的胶块太大，应先将其切成小块，然后分两次回收。
3. 电泳缓冲液pH值太高：硅胶膜在高盐及低pH值（pH≤7.5）时可结合DNA，在低盐及高pH值（pH≥8）条件下洗脱。如果电泳缓冲液pH值太高，会导致DNA无法结合或降低结合率。可在溶胶后加入3M乙酸钠（pH 5.0）10μl，将pH值调至7.5以下。
4. 漂洗液中未加无水乙醇：第一次使用前应在漂洗液中加入无水乙醇。漂洗液每次用后应拧紧瓶盖，以免乙醇挥发，降低回收率。
5. 洗脱缓冲液不合适：DNA只在低盐溶液中才能被洗脱，如试剂盒中的洗脱缓冲液TE (10 mM Tris·Cl, pH 8.5)或水。洗脱效率还与pH值有关。最大洗脱效率在pH 7.0–8.5间。当用水洗脱时请确保其pH值在此范围内。
6. 洗脱缓冲液未加在离心柱中间，尤其使用较少量洗脱缓冲液时：应滴加在离心柱正中间，并放置1–2分钟，再离心。
