耐热DNA聚合酶简介
合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素,如何选择最合适的耐热DNA聚合酶,是用户首先考虑的问题。目前市面上有多种DNA聚合酶,虽然名称各不相同,但主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。
我公司生产的5种耐热DNA聚合酶全部采用国外生产工艺和质量检测标准生产;是经过多次分子筛,离子交换层析柱纯化的,去除了宿主DNA和蛋白酶等杂质的超纯型产品。特异性非常好,且特别稳定。经检测,室温放置1个月,活性不发生改变。
Taq | 扩增效率最高的耐热DNA聚合酶,能很好地扩增6kb以下的DNA片段。 |
Pfu | 目前保真度最高的耐热DNA聚合酶,但扩增效率低于Taq酶,能很好的扩增2kb以下的片段。一般用于点突变,基因筛选等对保真性要求很高的DNA扩增。 |
Taq Plus | 集高效扩增和高保真度于一体,能有效地扩增10kb以下的片段,扩增效率比Pfu高,保真度比Taq酶好,对于有些结构复杂的模板,如GC含量高,有二级结构等可选用Taq Plus扩增。 |
HotStart | 采用了创新的合成亲和性配体技术,该配体可以以一种温度依赖性的方式,可逆性地阻断酶的活性。能最大限度的减少PCR扩增全过程中的非特异性扩增,大大提高了PCR反应的特异性。能很好地扩增6kb以下的DNA片段,PCR产物 3'端加A,可直接用于TA载体克隆。 |
Long Taq | 具有3'到5'外切酶活性的耐热DNA聚合酶,它不但扩增效率高而且错配率低,对简单模板可扩增长达40kb的片段,对复杂模板也可扩增长达15kb的片段,特别适合于长片段的扩增,如构建基因图谱及分子遗传学研究等。 |
耐热DNA聚合酶长度、扩增效率和保真度比较
| 项目 | Pfu | HotStart Taq | Taq | Taq Plus | Long Taq |
DNA | 良好地扩增 | <3kb | <8kb | <8kb | <20kb | <25kb |
可能扩增 | <5kb | <12kb | <12kb | <30kb | <40kb | |
Genomic DNA | 良好的扩增 | <2kb | <6kb | <6kb | <10kb | <20kb |
可能扩增 | <4kb | <8kb | <8kb | <20kb | <40kb | |
| 扩增效率 | + | +++ | ++++ | +++ | ++++ |
保真度比较 | 10 | 1 | 1 | 5 | 3 |
注: 将Pfu酶的保真度设置为10